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La reacción en cadena de la polimerasa (PCR)


Secuencia de la PCR

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un proceso artificial para la amplificación de ADN.
Encuentra aplicación práctica en pruebas de paternidad, huellas genéticas para crímenes criminales o para la detección de enfermedades (enfermedades genéticas e infecciones virales)
En un denominado termociclador, el ADN a amplificar se une con nucleótidos libres, ADN polimerasas y cebadores especiales. El termociclador permite una secuencia automática de la PCR, ya que lleva varios ciclos hasta que se haya amplificado suficiente ADN. Ya una cadena doble de ADN es suficiente para aplicar el procedimiento. El número de dúplex de ADN aumenta exponencialmente por ciclo (1-2-4-8-16, etc.), de modo que haya suficiente material genético disponible después de 30-50 ciclos. Sin embargo, en la reacción en cadena de la polimerasa, no se amplifican dúplex de ADN completos, sino solo secciones predeterminadas. Estas secciones se pueden definir con mucha precisión mediante cebadores sintetizados artificialmente.
desnaturalización: El ADN se calienta a aproximadamente 90 ° C, lo que disuelve los enlaces de hidrógeno entre las bases complementarias. Esto separa el ADN en sus cadenas individuales.
hibridaciónA aproximadamente 60 ° C, los cebadores específicos se recogen en los extremos 3 'de las cadenas simples de ADN. Se aplica el principio de complementariedad: según sus bases, los cebadores solo pueden unirse a una contraparte complementaria (adenina con timina y citosina con guanina).
polimerización: La temperatura se eleva a aproximadamente 70 ° C. Las ADN polimerasas comienzan en los cebadores de 3 'a 5' con la unión de bases complementarias (alargamiento). Al final, se han creado dos cadenas simples de ADN, dos cadenas dobles de ADN.
Ahora, como ya se mencionó, hay una repetición de estos tres pasos.